Biyolojinin gelişimi, genetik dizilere ilişkin yapılan keşiflerle radikal bir şekilde değişmiştir. Genetik dizilerin belirlenmesi ve yapılan analizler sonucunda elde edilen bulgular, biyolojinin gelişiminde önemli bir rol oynamaktadır. Geçmişten günümüze bilim insanları tarafından yapılan destekleyici ve tamamlayıcı araştırmalar, bugünkü bilimsel teknolojilerin temelini oluşturmaktadır. Organizmadan saf DNA elde etmeyi mümkün kılan rekombinant DNA tekniklerinin gelişimiyle paralel olarak, DNA dizisi analiz yöntemleri de evrim geçirmiştir.Bugün DNA dizileme analizinde iki yöntem kullanılmaktadır. Bu iki yöntem birbirinden farklıdır: Maxam ve Gilbert'in kimyasal dizileme yöntemi ve Sanger-Coulson'un zincir sonlandırma yöntemi.Maxam ve Gilbert, DNA molekülündeki nükleotid dizisini belirlemek için hidrazin, dimetil sülfat veya formik asit kullanmışlardır. Bu uygulamada, tüplerdeki DNA molekülleriyle birlikte eklenen piperidin etkisiyle tüplerdeki nükleotidler değişir. Böylece DNA zincirleri kimyasallar kullanılarak kırılır. Nükleotid dizisi belirlenecek olan DNA, önce fosfat ucu (5') veya floresan boya ile 32P radyoaktif fosfor izotoplarıyla işaretlenir. Ardından DNA çift sarmalı birbirinden ayrılır veya uygun bir restriksiyon enzimiyle kesilir. Böylece DNA'nın sadece bir ucu işaretlenir. İkinci adımda, DNA molekülleri dört tüpe ayrılır ve A, C, G veya T nükleotidlerini değiştirmek ve kırmak için belirli reaksiyonlar gerçekleştirilir. Reaksiyon için sınırlı bir süre verilerek, her tüpte seçilen nükleotidlerden farklı noktalarda DNA parçaları elde edilir. Sonuç olarak, tümü 5'-konumlarından işaretlenen ancak uzunlukları farklı olan bir dizi DNA parçası elde edilir. Bu elde edilen DNA dizilerinin uzunluğu giderek kısalır. Bu DNA dizileri, boyutlarına göre jel elektroforeziyle birbirinden ayrılır ve bantlar oto radyografi uygulanarak görüntülenir. Maxam ve Gilbert yönteminde bazlara özgü zincir kırma için kullanılan kimyasallar Tablo 1'de verilmiştir.Maxam ve Gilbert kimyasal dizileme yönteminde bazların kırılması için kullanılan kimyasallar Tablo 1'de verilmiştir.(AI)
Atıf Sayısı :